超純水對(duì)HPLC的重要性

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是一種有效可靠的技術(shù)，目前已成為許多實(shí)驗(yàn)室研究的重要工具。HPLC最常見的一個(gè)問題就是溶劑中的污染物對(duì)分析結(jié)果的影響。

首先我們來看一看常見污染物有哪些？

1、可見雜質(zhì)

可見雜質(zhì)可以損壞泵和注射器，也可以堵塞色譜柱并且熔化它，這會(huì)導(dǎo)致回壓增大。顆粒還會(huì)表現(xiàn)為另一種固相，可能改變樣品的組分。

2、有機(jī)物

超純水中的有機(jī)物可能影響色譜峰的分離度和積分、可能導(dǎo)致鬼峰、還可能改變固定相的選測性以及影響色譜基線。

3、離子

離子濃度的改變會(huì)影響分離結(jié)果，部分能吸收UV的離子會(huì)對(duì)峰產(chǎn)生影響。某些有腐蝕性離子的還會(huì)降低高壓輸液泵等配件的使用壽命。

4、膠體

膠體會(huì)不可逆的吸附在固定相上面，影響柱的分離效果。

5、微生物

微生物會(huì)堵塞色譜柱，其代謝產(chǎn)物會(huì)增加有機(jī)物，顆粒等污染物。

目前，部分HPLC分析中使用的純凈水和蒸餾水，由于純凈水和蒸餾水均只是普通純水而不是超純水，水中仍含有少量離子和有機(jī)物等雜質(zhì)，用以配制液相和洗脫液不僅可能污堵昂貴的色譜柱，也影響HPLC定出平坦的基線。

純凈水的純化工藝包括吸附、過濾、反滲透等，對(duì)顆粒性有機(jī)物有一定的去除效果，但對(duì)微量離子及有機(jī)物的去除卻不能滿足高靈敏度的HPLC，并且，如果保存不當(dāng)，水質(zhì)下降更多，因此表現(xiàn)在HPLC色譜圖上，雖無特定吸收峰，但基線存在較嚴(yán)重的不穩(wěn)干擾。

蒸餾水是指用蒸餾方法制備的純水。可分一次和多次蒸餾水。水經(jīng)過一次蒸餾，不揮發(fā)的組分殘留在容器中被除去，揮發(fā)的組分進(jìn)入蒸餾水的初始餾分中，通常只收集餾分的中間部分，約占60％，要得到更純的水，可在一次蒸餾水中加入堿性高錳酸鉀溶液，除去有機(jī)物和二氧化碳；加入非揮發(fā)性的酸（硫酸或磷酸），使氨成為不揮發(fā)的銨鹽。通過對(duì)雙蒸水進(jìn)行HPLC檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，254nm和214nm在22-27分鐘時(shí)都出現(xiàn)較強(qiáng)的吸收峰，這表明有疏水性較強(qiáng)的有機(jī)物污染，其原因應(yīng)是蒸餾過程的共沸現(xiàn)象導(dǎo)致了某些揮發(fā)性有機(jī)物去除不徹底。

綜上，為了能滿足高了靈敏度的HPLC，達(dá)到較穩(wěn)定準(zhǔn)確的分析結(jié)果，建議HPLC分析中使用超純水。

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